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黄曲霉毒素总量免疫亲和柱使用说明书 |
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发布时间：2022-12-07 14:13:34 |
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概要
黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的真菌毒素，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物，对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力最强，还能引起突变和导致畸形。世界各国对食品及饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。
测定原理
此免疫亲和柱以抗体-抗原特异性反应为基础，含有和黄曲霉毒素抗体结合在一起的凝胶。上样时，经提取、过滤、稀释后的样品缓慢地通过黄曲霉毒素免疫亲和层析柱，在柱内黄曲霉毒素与抗体结合，其他物质不会结合而直接流出。此后洗涤免疫亲和柱，完全除去未结合的其他物质。最后加入甲醇，将黄曲霉毒素释放并洗脱，再注入到分析仪器中进行检测。
适用范围及用途
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2检测的净化。可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA等定量分析，适合谷物、食品和饲料等样品。
产品参数及规格
货号：AFMT103 柱容积：3ml
柱容量：300 ng 黄曲霉毒素 规格：20支/盒
储存条件：2-8 ℃
注意事项
1)黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。
2)使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。
3)切勿使用过了有效日期的免疫亲和柱。
4)亲和柱于2-8 ℃冷藏保存，不可冷冻。
5)使用前，免疫亲和层析柱需回至室温（22-25 ℃）。
6）免疫亲和柱内的液体为PBS缓冲溶液，起到保护凝胶的作用。在使用过程中，上样前不要将PBS缓冲溶液排空，将注射器连接于免疫亲和柱上端之后，取样品于注射器中，再拧开下端的下盖，和PBS缓冲液一起流出。
7)当样品进行上样、淋洗、洗脱等操作时，需要控制好流速，流速不能太快，否则会使检测结果偏低。
8）在上柱前需要确认上柱前的溶液中的甲醇浓度不能超过25%，否则会影响柱子的吸附能力。
9）在淋洗完吹干柱子中的水之后，再加甲醇进行洗脱时，不要立即将甲醇洗脱下来，甲醇需润湿柱子30秒左右之后，再将甲醇缓慢的洗脱下来（以流速2-3滴/秒每滴）。
10）氮吹过程中，氮气的气流量不要太大，不要将溶液完全吹干，防止目标物损失。
操作流程 （符合GB 5009.22-2016与GB/T 18979-2003国标方法）
一般固体、油脂和液体等样品的具体提取方法请参考相应的国标方法
1)粉碎好的样品过20目筛并在取样前彻底混合，不立即分析的样品应放在冰箱中储存。
2)称取20 g粉碎样品及4 g氯化钠，加入100 mL 70%甲醇/水。
3)高速均质约3分钟，或振荡器振荡约20分钟。
4)过滤样品至少10 mL。
5)取10 mL滤液加入20 mL水，彻底混合。
6)用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取15 mL准备加入到免疫亲和柱中过柱。
7)将10 mL注射器连接于免疫亲和柱上端。
8)取15 mL处理好的样品溶液以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。
9)加10 mL水淋洗柱子两次，弃掉流出的液体。
10)利用真空设备压入空气或用注射器吹干柱子中的水。
11)加入2×1mL甲醇缓慢洗脱亲和柱，流速约为2-3秒每滴。
12)在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干（不要吹干），加入1.0 mL初始流动相，0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。
液相色谱测定条件
检测器：荧光检测器
激发/发射波长：360 nm/440 nm
流动相：甲醇:水 = 45:55
流速：0.8 mL/min
进样量：20 uL
柱温：30 ℃
反应时间：10 min
用进样器吸取20 uL黄曲霉毒素标准工作溶液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素标准溶液的高效液相色谱图。
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