本研究利用固相萃取法作为植物油的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测其中苯并(a)芘的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物

苯并(a)芘(CAS:50-32-8)。

三、应用范围

本方法适用于植物油中苯并(a)芘的检测的HPLC检测及确证。

四、参考标准

《GB 5009.27-2016 食品安全国家标准 食品中苯并(a)芘的测定 》。

五、实验材料

 苯并芘检测柱22g/60mL(HuaXue-Bio Cat. No. BAP6022G)。

六、实验步骤

1、样品提取
准确称取植物油样品0.4 g于15 mL离心管中加入5 mL 正己烷，涡旋1 min。待净化。

2、SPE柱净化
(1) 活化：苯并芘检测柱使用前用30 mL正己烷活化 。
(2) 上样和洗脱：在苯并芘检测柱上加入待净化样品，收集流出液，然后用40 mL正己烷-二氯甲烷溶液（3:1，v/v）洗脱，收集流出液，合并流出液。（在上样洗脱的过程中，要注意柱体不能干涸。)
(3) 重新溶解：流出液50 ℃减压蒸馏至近干，加1 mL甲基叔丁基醚定容，过0.45 μm滤膜，待上机测试。

3、HPLC条件
设 备：Waters Alliance 2695
色谱柱 ：HuaXue-Bio C18 (4.6×250 mm，5μm)
检测器 ：Waters 2475荧光检测器
流动相：A：乙腈 B：水
洗脱方式：等度洗脱 A:B=88:12
流速：1 mL/min
发射波长：406 nm
激发波长：384 nm
进样体积: 10 μL

七、实验结果

1、0.05 mg/kg植物油中苯并(a)芘添加回收结果
表1 0.05 mg/kg植物油中的苯并(a)芘添加回收结果

2、添加水平为0.05 mg/kg植物油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

图1 添加水平为0.05 mg/kg植物油中苯并(a)芘检测的液相色谱图

结论：本方法在植物油中苯并(a)芘检测的平均回收率是90.0%,RSD是2.73%。